顯微鏡技術(shù)隨著多年的發(fā)展已經(jīng)相當(dāng)成熟碟摆，熒光顯微觀察是七種顯微觀察方式之一，而近些年激光技術(shù)的發(fā)展極大的提升了熒光顯微鏡
的成像效果叨橱。
現(xiàn)在大家所常見的普通光學(xué)顯微鏡是在16世紀(jì)末期在荷蘭發(fā)明的典蜕，當(dāng)時(shí)的顯微鏡非常的簡陋断盛，只是由兩片凸透鏡組合而成的，在幾十
年之后意大利科學(xué)家伽利略才真正意義上第一次在科學(xué)上使用顯微鏡愉舔，隨著光學(xué)顯微鏡的發(fā)展钢猛，顯微鏡的組成結(jié)構(gòu)越來越復(fù)雜，顯微鏡
的功能越來越強(qiáng)大轩缤，顯微鏡的分辨率也越來越高命迈，隨之顯微鏡也有了多種觀察方式。
在現(xiàn)在成熟的商業(yè)顯微鏡上火的，分別有七種顯微觀察方式來對(duì)應(yīng)不同類型的顯微鏡壶愤，并且同一臺(tái)顯微鏡也可以配備多種顯微觀察方式，顯
微鏡的七種觀察方式分別是馏鹤，明視野觀察（Bright Field BF）也叫明場(chǎng)征椒，暗視野觀察（Dark Field）也叫暗場(chǎng)，相差檢測(cè)法（Phase
contrast PH）湃累，偏光顯微鏡（Polarizing勃救，micoscope），浮雕相稱顯微鏡（RC HMC）也叫霍夫曼（Hoffman）顯微鏡治力，微分干涉
檢測(cè)（Differential interference contrast DIC）蒙秒，以及今天我們要說的熒光觀察（fluorescence Microscope）
要介紹熒光顯微鏡，我們需要先簡單介紹一下熒光原理：
在光的照射下宵统，具有熒光特性的物質(zhì)的電子在吸收能量后晕讲，可由低能級(jí)電子層躍遷到高能級(jí)電子層。高能態(tài)的電子是不穩(wěn)定的榜田，它會(huì)在
極短的時(shí)間內(nèi)（10-8s）益兄，以輻射光的形式釋放能量后，回到原來的能態(tài)箭券。這時(shí)發(fā)出的光即為熒光（fluorescence），其波長比激發(fā)光
的波長要長疑枯，原理如圖2-6所示辩块。利用物質(zhì)對(duì)光吸收的高度選擇性，可制成各種濾片荆永，吸收一定波長范圍的光或允許特定波長的光通
過废亭，用來激發(fā)不同的熒光素，產(chǎn)生不同顏色的熒光具钥。
對(duì)于熒光的激發(fā)波長一般都在紫外和可見波段豆村，而對(duì)于熒光的發(fā)射波段一般都在可見光波段
觀察熒光一般都采用落射熒光觀察方式，就是激發(fā)光是由顯微物鏡照射到樣品上骂删，而不是大家常見的在樣品下方進(jìn)行透射照明的方式掌动，
當(dāng)然也存在一些使用透射熒光的觀察方式四啰，但是一般來說熒光的發(fā)射光是在樣品360度方向都有發(fā)射光，而且發(fā)射光的強(qiáng)度只有激發(fā)光
強(qiáng)度的千分之一到百萬分之一的量級(jí)粗恢，如果跟激發(fā)光同方向檢測(cè)的話柑晒，會(huì)很大程度上干擾檢測(cè)，成像的信噪比很差眷射，甚至噪聲干擾信號(hào)
會(huì)強(qiáng)于有效信號(hào)匙赞。
圖中就是落射熒光顯微鏡的示意圖
在熒光激發(fā)方面，我們可以使用汞燈妖碉，LED燈等這類常見的照明光源來進(jìn)行熒光激發(fā)涌庭，但此類照明方式有著明顯的缺點(diǎn)，在使用第一濾
光片濾出單色光之后欧宜，其光強(qiáng)度非常的低坐榆，使得熒光信號(hào)強(qiáng)度也大幅降低，并且此類光源強(qiáng)度隨著使用時(shí)間會(huì)有非常明顯的功率下降鱼鸠，
此類光源一般使用壽命也都不長猛拴，現(xiàn)如今隨著激光技術(shù)發(fā)展成熟，現(xiàn)在的熒光顯微成像大都會(huì)使用激光作為激發(fā)光源蚀狰，使用Oxxius多
波長合束激光器來進(jìn)行熒光激發(fā)愉昆，使用多波長合束激光器來進(jìn)行熒光熒光激發(fā)會(huì)有非常好的激發(fā)光強(qiáng)度，激發(fā)光功率連續(xù)可調(diào)麻蹋，不需要
加減光片來調(diào)節(jié)光強(qiáng)度跛溉，并且可以對(duì)激光進(jìn)行高達(dá)兆赫茲級(jí)別的高速調(diào)制，這一點(diǎn)在某些超分辨顯微成像方式里有著顯著的優(yōu)勢(shì)扮授，而且
因?yàn)閛xxius合束激光器是線偏振激光芳室，還可以進(jìn)行某些熒光材料的偏振熒光分析。
在落射熒光顯微鏡中刹勃，除了光源堪侯，還有一個(gè)比較重要的組成部分就是熒光濾色塊，它是由一片激發(fā)濾色片（一般是帶通濾色片）荔仁，一片
二向色鏡和一片發(fā)射濾色片（一般是長通濾色片）組成的伍宦，如圖所示：
在使用不同的熒光染料時(shí)，需要配和不同的熒光濾色塊去使用乏梁，但如果使用激光就可以去除激發(fā)濾色片次洼，只需要二向色鏡和發(fā)射濾色片。
展示全部 
展示全部
