共焦掃描光學(xué)顯微鏡已經(jīng)徹底改變了重建活細(xì)胞三維圖像的方法琉用，它有了一個(gè)新的近親——共聚焦拉曼光譜堕绩。而將共聚焦拉曼光譜儀與
光學(xué)顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，這為細(xì)胞微結(jié)構(gòu)的成像與拉曼檢測提供了更有利的方法奴紧。
共聚焦拉曼光譜技術(shù)結(jié)合了共焦光學(xué)的使用，將樣品檢測范圍縮小到了極小的體積(1 μm3)绰寞，并且拉曼光譜具有區(qū)分化學(xué)鍵的能力到逊。因
此，共聚焦拉曼光譜可以提供一種高分辨率的方法來檢測例如染色體結(jié)構(gòu)域的組成滤钱。
使用共聚焦拉曼光譜技術(shù)研究染色體的初步結(jié)果表明觉壶，蛋白質(zhì)與脫氧核糖核酸的比例在多線帶狀染色體上的變化很大，其中在帶內(nèi)最
高铜靶，在帶間區(qū)域較低，在端粒處最低他炊。共聚焦拉曼光譜還可以與免疫熒光技術(shù)相結(jié)合争剿，檢測特定抗體標(biāo)記的位點(diǎn)，并對(duì)這種標(biāo)記技術(shù)干
擾天然結(jié)構(gòu)的程度提供積極有用的檢查痊末。
下圖的應(yīng)用研究的對(duì)象是多線染色體的帶型蚕苇，測量是在共聚焦拉曼光譜儀上進(jìn)行的凿叠，激發(fā)光波段為660納米涩笤，激光功率為20毫瓦，63倍
水浸物鏡的NA為1.2蹬碧，測量時(shí)間為20 分鐘。研究對(duì)象是來自生理分離的搖蚊唾液腺染色體炒刁，這些染色體的帶狀圖案能在光學(xué)顯微鏡下
很容易的觀測到恩沽。將激光聚焦成直徑0.5微米的光斑，出射激光束在樣品上掃描翔始，拉曼信號(hào)通過光柵成像ccd相機(jī)上罗心，這種方式可以同
時(shí)記錄染色體掃描線上的光譜信息城瞎。在圖1中渤闷，顯示了來自搖蚊多線染色體的線掃描拉曼圖像光譜信息，光譜信息在水平方向肤晓。而顯示
在另一個(gè)方向上的染色體的橫向方向被證明具有0.5 微米數(shù)量級(jí)的分辨率爷贫。從該拉曼光譜圖像中通過使用1094波數(shù)的DNA主鏈振動(dòng)和
1449 波數(shù)的蛋白質(zhì)振動(dòng)可以獲得關(guān)于染色體上的DNA和蛋白質(zhì)含量的信息认然。這些數(shù)據(jù)表明补憾，搖蚊唾液腺染色體帶和帶間的DNA含量在
1:0.9和1:0.6之間變化(帶:帶間)，而蛋白質(zhì)含量的比例似乎跟隨著脫氧核糖核酸的含量卷员，更確切的關(guān)系還有待進(jìn)一步證明盈匾。
圖1:一部分生理分離的搖蚊多線染色體的線掃描拉曼圖像(右邊)
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展光電流成像應(yīng)用與熒光壽命檢測應(yīng)用。
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